RIPA裂解液(RIPALysisBuffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液辛可宁 。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP和ELISA等。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。RIPA裂解液(强)的主要成分为50mMTris(pH7.4)，150mMNaCl，1%TritonX-100，1%sodiumdeoxycholate，0.1%SDS，以及sodiumorthovanadate，sodiumfluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。  
 产品名称规格  
RIPA裂解液（强）100ml  
抑制剂1ml  
PMSF1ml  
使用说明书一份  
存储条件：RIPA裂解液保存于2~8℃，其余保存于-20℃。12个月有效期。  
试剂准备：  
RIPA裂解工作液：取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入1%抑制剂，1%PMSF。  
操作步骤（仅供参考）：  
一 对于贴壁细胞  
1. 弃去细胞培养基，用1× PBS洗涤细胞2次；  
2. 尽可能的弃去PBS（多余的液体将降低裂解液的浓度）；  
3. 将适当的RIPA裂解工作液加入细胞中（0.5~5×107细胞中加入1mL裂解工作液），在冰上孵育5min；  
4. 使用塑料细胞刮刀使劲刮（可帮助细胞裂解），将所有液体转入新的离心管中；  
5. 在4°C下，12000g离心5min；  
6. 小心的将上清液（蛋白样品）移入新的试管中；  
7. 分装蛋白样品并保存于-80°C直至使用时。  
二 对于悬浮细胞  
1. 将细胞转移至离心管中，离心弃培养基；  
2. 用1× PBS洗涤细胞2次；  
3. 尽可能的弃去PBS（多余的液体将降低裂解液的浓度）；  
4. 将适当的RIPA裂解工作液加入细胞中（0.5~5×107细胞中加入1mL裂解工作液），在冰上孵育5min；  
5. 在4°C下，12000g离心5min；  
6. 小心的将上清液（蛋白样品）移入新的试管中；  
7. 分装蛋白样品并保存于-80°C直至使用时。  
三 对于组织样品  
1. 把组织剪切成细小的碎片。  
2. 在20mg组织中加入150~250μL裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)  
3. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。  
4. 充分裂解后，10000~14000g离心3~5min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。  
5. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。  
注意事项：  
1 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。  
2 RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为 含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。  
3 不同的细胞需要加入的裂解液的量可能会不同，需要根据具体条件进行条件筛选；  
4. 若裂解液产生沉淀或者析出，可在37℃水浴中孵育，振荡使沉淀或析出物溶解，若不能溶解，可适当加热助溶。 温馨提示：为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，带手套辛可宁等。